- Những nhân vật từ SS1:

Itsuka Shidou

Yamai Yuzuru (bên trái)
Yamai Kaguya (bên phải)

Kyouno Natsumi: sau khi trải qua mọi chuyện, vẻ ngoài của Natsumi đã trở nên trưởng thành và xinh đẹp hơn

Itsuka Kotori (ko thể tiết lộ lý do nv này xuất hiện ở phần này)

Tobiichi Origami (ko thể tiết lộ lý do nv này xuất hiện ở phần này)

*Miku, Mana, Hiroto, Tamae đã hi sinh nên sẽ ko xuất hiện. Yoshino, Kurumi, Shiori ko xuất hiện vì họ ko có đất diễn ở SS2 mà chỉ được nhắc đến

- Những nhân vật mới:

Hoshimiya Mukuro: 29 tuổi, đội trưởng đội phòng chống vũ khí sinh học

Honjou Nia: 27 tuổi, sĩ quan của đội phòng chống vũ khí sinh học

Mayuri: 23 tuổi, nhân viên y tế của đội phòng chống vũ khí sinh học

Higoromo Hibiki: 26 tuổi, giám đốc của 1 công ty lớn

Ellen Mira Mathers: 23 tuổi, thư kí của Hibiki

Murasame Reine: ko rõ tuổi, 1 nữ đặc vụ của đội phòng chống vũ khí sinh học đến từ Nga

Sir Isaac Ray Pelham Westcott